本產(chǎn)品是采用膠體金免疫層析技術(shù)快速檢測分泌到慢病毒包裝上清中的游離囊蛋白P24,以此作為一個靈敏的、間接的替代指標來顯示病毒產(chǎn)量的檢測卡,通過對囊蛋白 P24 的檢測,能快速確定包裝液中的慢病毒滴度是否已經(jīng)達到收獲需要。該方法僅需要 5~10min 即可得到結(jié)果,與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法需要花費2-3天相比,具有明顯優(yōu)勢。
產(chǎn)品性質(zhì)
關(guān)于慢病毒滴度
一個慢病毒顆粒(Lentiviral Particle, LP)中約有 2000 個 P24 蛋白分子,用以下公式可以計算慢病毒載體的顆粒數(shù)(LP):
一個 LP 相當(dāng)于:2000×24×10^3/(6×10^23)g of P24=8×10^-5 pg of P24;或者說,1ng P24=1.25×10^7 LPs(≈1.25×10^4-5 TU**)
正常情況下,每 100-1000 LPs 中會有 1 個具有感染活性的病毒載體,即 1 TU(Transducing Unit)。
注意:上述公式計算得到的 LP 值是理論值,檢測樣品中含有的游離的 P24 蛋白可能會使該值偏高。
提示:通常上清中病毒含量需要超過 10^6 TU/ml,才能確保濃縮純化后得到足夠濃度的慢病毒載體(一般能濃縮 150 倍左右)。
本法給出的是檢測線(T 線)強度與功能滴度(Infectious Unit/mL, IFU/mL 或 Transduction Unit/mL, TU/mL)而非物理滴度(Viral Particle/mL, VP/mL)的相關(guān)性。這一相關(guān)性與病毒所轉(zhuǎn)染的細胞有關(guān)。例如,上圖中,用 3 倍連續(xù)稀釋的包裝上清轉(zhuǎn)染 HEK293 細胞。72 小時后,在熒光顯微鏡下觀察表達 ZsGreen1 的細胞,并用流式細胞儀測定HEK293 細胞的轉(zhuǎn)染率,得到功能滴100µL 滴度為 2 10 6 IFU/ml 的包裝上清加到樣品孔中,10 分鐘后顯深紅色“T 線"。
1. 打開包裝取出檢測卡,平放在實驗臺上;
2. 用微量移液器吸取加 80~100µL 包裝上清,滴加到加樣
結(jié)果判定
1. 在可視窗口中,質(zhì)控線(C)和檢測線(T)均顯色即為陽性;
2. 質(zhì)控線(C)顯色,檢測線(T)不顯色,檢測結(jié)果為陰性;
3. 根據(jù) P24 含量的多少,(T)線顏色有所不同,含量越高,顏色越深;含量越低,顏色越淺;
4. 質(zhì)控線(C)不顯色,無論檢測線 (T)是否顯色,檢測無效;